ген rhd выявлен что это значит
Ген rhd выявлен что это значит
Генетический маркер, используемый для определения резус-фактора плода по фетальной ДНК. Анализ выполняется только с 10-й недели беременности при отрицательном резус-факторе беременной женщины.
Выявление наличия/отсутствия 7-го и 10-го экзонов гена RHD; генотипирование гена RHD по фетальной ДНК.
Fetal RHD genotyping test.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь беременной женщины с серологическим отрицательным резус-фактором с 10-й недели беременности.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
С точки зрения иммунологии беременность на всём протяжении рассматривается как процесс смены этапных иммунных конфликтов. В основном эти конфликты являются нормальными физиологическими процессами и не только не оказывают патологического воздействия на организм матери и плода, но и помогают нормальному течению беременности. С их помощью реализуются такие этапы беременности, как имплантация плода, формирование гормонального фона беременности и, конечно, сами роды. Кроме того, существует ряд патологических конфликтов, которые могут существенно осложнять течение нормальной беременности, иногда приводя к летальному исходу. Одним из них является резус-конфликт между матерью и плодом.
В настоящее время существует два основных метода определения резус-фактора. Первый метод – серологический – подразумевает выявление антигена D на поверхности эритроцитов с помощью специфических антител. Он подходит для широкого рутинного обследования. К существенным ограничениям этого метода относятся: 1) необходимость наличия для исследования живых эритроцитов, что делает невозможным использование его в пренатальной диагностике резус-фактора плода; 2) наличие мутации внутри гена RHD либо изменение уровня его экспрессии. В данных случаях серологическое исследование может дать ложноотрицательный результат (Rh- при наличии гена RHD), так как диагностические антитела не смогут связаться с поврежденными или отсутствующими молекулами антигена D.
С учетом того что концентрация фетальной ДНК в крови матери крайне низкая, а также с учетом возможности наличия серологического ложноотрицательного резус-фактора у матери и наличия мутаций в гене RHD генотипирование резус-фактора плода проводят, исследуя ряд показателей: 1) наличие/отсутствие не менее двух фрагментов (7-й и 10-й экзоны) гена RHD; 2) с учетом сигнала от геномной ДНК матери.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
C 10-й недели беременности.
Что означают результаты?
В процессе исследования формируется четыре типа заключения.
1. Отсутствие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне достаточного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется отрицательный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние не требует терапевтической коррекции.
2. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется положительный резус-фактор плода у резус-отрицательной матери. Данное состояние может вызывать резус-конфликт (особенно при повторных беременностях) и требует терапевтической коррекции. Следует отметить, что у матери должен быть серологически подтвержденный отрицательный резус.
3. Наличие обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне равного количества сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется, возможно, положительный генетически резус-фактор у матери, резус-фактор плода идентифицировать не представляется возможным.
4. Наличие слабого сигнала обоих фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне слабого сигнала геномной ДНК. В этом случае констатируется сомнительный результат. Наличие слабого сигнала геномной ДНК, независимо от сигнала с обоих фрагментов гена RHD, либо наличие одного из двух фрагментов гена RHD в исследуемом материале на фоне высокого количества сигнала геномной ДНК указывает на недостоверный результат. Во всех этих случаях требуется проведение повторного исследования.
Что может влиять на результат?
Данное исследование должно проводиться при каждой беременности у резус-отрицательной матери.
Кто назначает исследование?
Акушер-гинеколог, терапевт, гематолог, врач ОВП.
Определение резус-фактора плода по крови беременной женщины
Генетическое исследование, которое позволяет определить резус-фактор плода по крови резус-отрицательной беременной женщины методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
OMIM: MIMID *111680
Локализация: 1p36.11
Ген RHD плода по анализу материнской крови, неинвазивное типирование гена RHD плода.
Синонимы английские
RhD (Rh blood group, D antigen); Rhesus blood group, D antigen, Fetal RHD typing, Noninvasive RHD typing, Cell-free fetal DNA testing.
ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозная кровь (пробы ДНК, выделенные из плазмы крови матери).
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Подробнее об исследовании
Метод позволяет идентифицировать резус-фактор плода по крови матери уже с 10-й недели беременности.
С RhD-антигеном связана проблема сенсибилизации резус-отрицательных женщин резус-положительными эритроцитами плода, что может привести в дальнейшем к тяжелой патологии – гемолитической болезни новорожденных.
Принцип метода основан на выявлении гена RhD, который отвечает за синтез антигена D и есть только у резус-положительных людей. Резус-отрицательная женщина антигена D не имеет. Если ребенок оказался резус-отрицательным и в крови матери антиген D отсутствует, то тест будет отрицательным. Если же плод окажется резус-положительным, то в крови резус-отрицательной матери будет присутствовать ген RhD – тест будет положительным.
Среди более 100 Rh-антигенов наиболее иммуногенным и потому наиболее клинически значимым является RhD-антиген, с которым связано большинство осложнений, обусловленных резус-несовместимостью или резус-конфликтом.
Резус-фактор представляет собой белок, находящийся на поверхности эритроцитов (красных кровяных телец). Около 85% людей имеют резус-фактор и, таким образом, являются резус-положительными. У остальных 15% резус-фактор отсутствует, то есть они являются резус-отрицательными.
Резус-положительный тип определяется наличием гена RhD в гомозиготном (DD) или гетерозиготном (Dd) состоянии. Резус-отрицательный тип может быть обусловлен различными изменениями в структуре генов системы Rh. В большинстве случаев это делеция гена RhD на обеих хромосомах. При этом эритроцитарный антиген D не синтезируется и проявляется резус-отрицательный фенотип.
Резус-фактор наследуется как доминантный признак, поэтому у резус-отрицательной матери (dd) при генотипе DD резус-положительного отца ребенок всегда будет ресус-положительным, а это значит, что риск резус-конфликта высок. В случае геотипа Dd резус-положительного отца возможности рождения ребенка как с положительным, так и с отрицательным резусом одинаковы. К счастью, не у каждой резус-отрицательной беременной женщины плод является резус-положительным.
Схема наследования резус-фактора представлена в таблице:
Ген rhd выявлен что это значит
В этой статье мы расскажем о редких вариантах гена RHD и особенностях оценки риска возникновения резус-конфликта. Гены RHD и RhCE у человека работают вместе: они кодируют белки, которые формируют в мембране комплекс, образовывающий базу для антигенов D (резус-фактор), C, c, E, e. Эти белки представляют собой как бы нитки, прошивающие мембрану петлями: их небольшие фрагменты торчат из мембраны, а основная часть находится в ее толще. То есть какие-то аминокислоты белка выполняют строительную функцию – держат белок в мембране, а другие основную – формируют площадку для антигена.
Если гена RHD нет из-за делеции этого участка хромосомы, то и белка на мембране нет. В таком случается получается истинный Rh- фенотип. Однако в редких случаях ген RHD не полностью отсутствует, а несет в себе мутацию. Тогда структура соответствующего белка может нарушаться и приводить не к полному отсутствию антигена D, а к разным промежуточным состояниям. Например, мутации, приводящие к изменению в тех частях белка, которые находятся в толще мембраны, могут влиять на способность белка держаться на поверхности клетки: то есть и ген RHD на месте, и белок нормально синтезируется, однако он с трудом встраивается в мембрану и потому его может быть настолько мало на поверхностях клеток, что иммунная система человека будет их замечать, а вот биохимические методы анализ на резус-фактор – не будут. В случае такого рода мутаций в гене RDH генотип называется Weak D или DEL вместо Rh-. Также при мутациях, затрагивающих выступающие из мембраны участки, антиген D будет неполноценным, так как площадка для его формирования будет неполная или не совсем верная, что тоже может привести к ложным результатам при биохимическом анализе крови. Такой генотип носит название Partial D.
Почему все это важно? Дело в том, что чаще всего статус резус-фактора определяют биохимически по анализу крови. Это значит, что в лаборатории есть антитела к антигену D, эти антитела капают на специально подготовленный препарат крови и смотрят, насколько сильно будет светиться специфическая метка. Если она светится слабо или сигнала нет совсем – это означает, что антителам не с чем было связываться, то есть антигена D на поверхности клеток в анализируемой крови не было. Для обычной ситуации – присутствие или отсутствие гена RHD – этот способ прекрасно работает, но он не позволяет отличить Rh+ гомо- и гетерозигот, поэтому его используют как скрининговый – простой и недорогой метод для первичного обследования. Однако в случае частичной делеции RHD или различных мутаций он срабатывает неправильно. При проверке работы четырех разных наборов реагентов для биохимического анализа крови на резус на 500 образцах для 2% образцов были получены неоднозначные результаты. После генетического тестирования оказалось, что именно эти образцы имели генотип Partial D или Weak D.
Примерные оценки вероятности развития резус-конфликта при разных сочетаниях генотипов родителей:
Опасность неправильного определения резус-статуса в сложных ситуациях заключается в том, что пара не будет подозревать о рисках, пока не возникнет опасная для жизни и здоровья малыша ситуация. Важно понимать, что главной проблемой при резус-конфликте является то, что организм матери не знаком с антигеном D как с нормальным, «своим», поэтому клетки, отмеченные этим антигеном, начинают отторгаться. При этом иммунная система может познакомиться с этим антигеном как со «своим» даже если этого антигена на поверхности клеток совсем немного, настолько немного, что биохимические методы ставят статус Rh-. В таком случае тревога о возможности развития резус-конфликта у женщины с таким неверным биохимическим анализом будет ложной. С другой стороны, если такой неверный результат будет выдан будущему отцу, то это может привести к развитию резус-конфликта, так как несмотря на биохимически отрицательный резус, ген RHD у отца присутствует и антиген D на поверхности клеток тоже есть. Таким образом, наиболее точный результат получается в результате генетического анализа гена RHD и гена RHCE, методом MLPA. Он позволит идентифицировать наличие/отсутствие гена RHD у будущих родителей, идентифицировать особые состояния этого гена, выявить гомо/гетерозиготность каждого партнера по этим показателям и более эффективно оценить не только вероятность развития резус-конфликта, но и целесообразность различных превентивных или терапевтических мер по устранению этого осложнения при беременности.
Важно помнить, что эти необычные ситуации все же редкость, и в большинстве случаев простой биохимический анализ крови дает верный результат. То есть после него резус-положительные женщины чаще всего спокойно беременеют вне зависимости от генотипа мужа по гену RHD, у резус-отрицательных женщин с резус-отрицательным партнером в большинстве случаев также нет проблем, а резус-отрицательные будущие мамы с резус-положительным отцом отправляются на дополнительные анализы для оценки рисков. Однако, к сожалению, вероятность несовпадения биохимического результата и истинного фенотипа, хоть и мала, но присутствует и может привести к катастрофическим для семьи результатам. Самое безопасное решение – узнать свой генотип по этим генам, который позволит совершенно точно узнать о том, есть ли повод для беспокойства.
Генетическое исследование резус-фактора плода
Описание
Резус-фактор (Rh) — это антиген (белок), который находится на поверхности эритроцитов, причём наиболее иммуногенным является антиген D (RhD), присутствие которого и определяет положительный резус-фактор (Rh+). Исследование выполняется с 9 полных недель беременности, т. е. с 10 недели.
Для проведения исследования необходимо предоставить копию УЗИ.
Если резус-отрицательная (Rh-) женщина беременна резус-положительным (Rh+) плодом, её иммунная система начинает вырабатывать анти-D-антитела, вызывающие разрушение эритроцитов плода. Как правило, анти-D-антитела отсутствуют при первой беременности Rh+ плодом, протекающей без осложнений, однако сенсибилизация матери возникает в процессе родов. При каждой последующей беременности или при повреждении плаценты увеличивается риск развития гемолитической болезни плода. 98% случаев гемолитической болезни новорождённых связаны именно с D-резус-антигеном. При раннем проявлении резус-конфликт может стать причиной нарушения развития плода, преждевременных родов или выкидышей.
Ген RHD
Делеция гена RHD в обеих гомологичных хромосомах обуславливает отрицательный резус-фактор. Наличие гена в гомозиготном или гетерозиготном состоянии определяет положительный резус-фактор у обследуемого. В случае если резус-положительные отцы являются гетерозиготными по резус-фактору, то у резус-отрицательных матерей даже при наличии отягощённого анамнеза плод в 50% случаев будет резус-отрицательным. Таким образом, для женщин с резус-конфликтной беременностью появилась возможность проведения пренатальной диагностики с целью определения резус-фактора на ДНК плода, выделенной из ворсин хориона (10–15 недель беременности) или из амниотической жидкости при проведении амниоцентеза (24 неделя беременности).
Если результаты молекулярно-генетического анализа показывают, что плод является резус-отрицательным, то отпадает необходимость в проведении последующих инвазивных процедур, и такие пациентки исключаются из дальнейшего обследования по тяжести развития гемолитической болезни плода. Кроме того, определение гетерозиготного генотипа по резус-фактору (RHD+/RHD-) у отца даёт основание для проведения преимплантационной диагностики при наличии отягощённого акушерского анамнеза (гибель детей от гемолитической болезни) и резус-сенсибилизации у матери. В результате при ЭКО будущей матери будут перенесены только резус-отрицательные эмбрионы.
Так как антирезусную профилактику иммуноглобулином человека рекомендовано проводить на 28 неделе первой и последующих беременностей, то определение резус-фактора плода на ранних сроках является необходимым. Определение Rh- плода в 1–2 триместре беременности позволит сократить расходы на регулярное определение титра анти-D-антител и антирезусную профилактику.
Показания
Беременным (Rh-)-женщинам с 12 по 27 неделю беременности, если (Rh+)-отец является гетерозиготным носителем гена RhD (Генотипирование системы RhD).
Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Интерпретация результатов
При отрицательном результате теста, статус плода считается с высокой вероятностью резус-отрицательным, однако рекомендуется повторять тест на более поздних сроках беременности (но не позднее 27-ой недели) для подтверждения.
Положительный результат теста считается показанием к введению антирезусного иммуноглобулина, однако вопрос о его введении должен решаться только акушером-гинекологом на основании и других методов диагностики резус-конфликта.
При отсутствии антител к Rh-фактору по результатам ИФА и положительном молекулярно-генетическом тесте, рекомендуется введение антирезусного иммуноглобулина в период от 28 недель беременности (для профилактики ГБН) и не позднее 72 часов после родов (для профилактики Rh-конфликта при следующей беременности).
Определение Rh плода по крови матери
Описание исследования
Резус (Rh) является одной из важнейших систем эритроцитарных антигенов, клинически значимой для определения степени риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода новорожденного (данная болезнь обусловлена несовместимостью матери и плода по антигенам эритроцитов и очень часто является причиной желтухи и малокровия у новорожденных).
Из пяти антигенов системы резус наибольшую иммуногенность (способность вызывать ответ иммунной системы организма) проявляет антиген D, кодируемый геном RHD. Положительный резус-фактор (Rh+) характеризуется присутствием данного антигена на поверхности эритроцитов, отрицательный резус-фактор (Rh-) – его отсутствием. Соотношение лиц с положительным и отрицательным резус-фактором приблизительно составляет 86 к 14% соответственно.
Частым осложнением беременности женщины с отрицательным резус-фактором является развитие гемолитической болезни плода. Данное состояние обусловлено попаданием через плаценту в кровь матери эритроцитов вынашиваемого ребенка. Подавляющее число случаев ГБН (гемолитической болезни новорожденного) вызывается действием D-резус-антигеном. Его попадание в кровь матери становится причиной образования специфических антител, проникновение которых через плаценту в организм ребенка вызывает разрушение эритроцитов. Развитие резус-конфликта на раннем сроке беременности может стать причиной выкидыша, а в дальнейшем – преждевременных родов. С каждой следующей беременностью резус-положительным плодом повышенная чувствительность матери к D-антигену и вероятность развития резус-конфликта повышаются, причем это не зависит от того, чем завершилась предыдущая беременность – родами или прерыванием.
На сегодняшний день существует комплекс исследований, предназначенный для выявления резус-конфликта. В него входят:
Инвазивные методы исследования в 2-3% случаев могут стать причиной самопроизвольного прерывания беременности, а отсутствие антител не является 100%-ным показателем резус-отрицательности плода. Дополнительная сложность ситуации состоит в возможности развития резус-конфликта на любом сроке беременности.
Кроме перечисленных, существует еще один метод диагностики – выявление ДНК плода в крови матери методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Преимуществами данного метода являются:
Кроме того исследование наличия ДНК ребенка в крови матери позволяет определить, насколько необходимо введение ей иммуноглобулина при отсутствии на сроке 20 недель анти-резусных антител.
Метод ПЦР имеет ограничение, т.к. у 1% женщин с отрицательным резусом может обнаруживаться ген RHD, причиной чему являются его различные мутации. Для таких пациенток исследование резус-фактора плода только методом ПЦР неприемлемо – необходимо также проведение серологических тестов. Резус-фактор считается отрицательным в том случае, если совпадают отрицательные результаты тестов.
ПЦР исследование не проводится, если у пациентки в прошлом были случаи трансплантации тканей и органов.
Аналитические показатели теста:
Подготовка к исследованию
Забор крови рекомендуется проводить утром натощак или не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.
Показания к исследованию
Тестирование проводится также в том случае, если есть необходимость введения беременной женщине с отрицательным резус-фактором иммуноглобулина к D-антигену плода с целью профилактики резус-конфликта.
Интерпретация исследования
Результат данного исследования может иметь следующие варианты:
1. Ген резус-фактора (RHD) плода не обнаружен. В этом случае принято считать, что резус-факто плода отрицательный, резус конфликт маловероятен (вероятность его не более 0,1%).
2. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружен. Интерпретация результата в этом случае формулируется так: резус-фактор положительный, резус конфликт возможен.
3. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружить невозможно. Данный результат интерпретируется так: ген (RHD) у матери обнаружен; данным методом невозможно выявить ген (RHD) плода. Не исключается вероятность развития резус-конфликта.
Применяемая для исследования тест-система включает опцию контроля взятия материала (КВМ). Если суммарное ДНК матери и ребенка ниже 0,1 нг в отобранной пробе, результат является недостоверным, а выдаваемый ответ содержит рекомендацию о повторном взятии пробы крови.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Петрова Инна Ивановна Пол: ж Год рождения: хх.хх.хххх
Дата исследования: хх.хх.хххх
Исследование
Результат
Нормы интерпретации
Примечание
[79] Определение Rh плода по крови матери
ВЫПИСКА
Резус-фактор плода (Ген RHD)
Чв 807 Иванова Пелагея Степановна
Внимание. Данное исследование проводится только у серологически резус-отрицательной пациентки при сроке беременности более 8 недель.
Заключение:
Возможно развитие резус-конфликта.
Точность результата зависит от количества ДНК плода, обнаруживаемой в материнской плазме. Данная величина обусловлена состоянием плаценты и возрастает с увеличением срока беременности.
Определение резус-фактора методом ПЦР в режиме реального времени заключается в обнаружении гена RHD плода, кодирующего D-антиген, в крови матери.
Традиционный серологический метод основан на выявлении непосредственно D-антигена на эритроцитах крови.
Согласно литературным данным, в 99% исследований результаты, полученные серологическим методом и методом ПЦР, совпадают. Однако у 1% генотипически резус-положительных лиц серологическим методом может определяться отрицательный резус-фактор, что связано с мутациями в гене RHD и, как следствие, отсутствием или функциональной неполноценностью D-антигена. Поэтому после родов рекомендуется уточнить резус-фактор ребенка серологическим методом.
Литература:
1. Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.
2. Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.
3. Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.
4. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.
5. Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.
6. Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.